沙棘汁减轻虾致敏小鼠的过敏症状

01

研究背景

对虾的主要过敏原是原肌球蛋白(TM)。80%的对虾过敏者对TM有反应。TM具有良好的稳定性,即使在水煮后,仍能保持其活性。目前只能从饮食上严格限制摄入引起致敏的食物。因为虾原肌球蛋白在加工食品中广泛使用,消除其食物过敏原困难很大。有必要探索新的方法来改善虾原肌球蛋白引起的过敏反应。

沙棘浆果富含维生素C、有机酸、类胡萝卜素和类黄酮等营养成分和生物活性物质。黄酮类化合物可能构成治疗食物过敏的重要疗法。沙棘汁是类黄酮摄入的主要来源之一。沙棘汁是否具有抗食物过敏活性尚不清楚。为了阐明这一点,本文建立了IgE介导的对虾过敏反应的BALB/c小鼠模型,用来验证沙棘汁可能具有抗过敏和免疫调节活性作用的假说。

02

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研究方法

采用南美白对虾为原料提取虾原肌球蛋白(TM),沙棘为新鲜沙棘经榨汁、过滤,冷藏保存。

动物实验选用BALB/c小鼠(雌性,6周龄),将小鼠随机分为对照组(NS)、TM致敏组(TM)、沙棘汁干预组(SJ)。除NS组外,于第7、14、21天每只小鼠注射200μLPBS溶液(含铝佐剂1mg,TM 0.15mg),NS组小鼠注射等体积PBS。SJ组小鼠每日灌胃2%沙棘汁,连续2周。阴性NS组和TM组接受等量的PBS。最后一次灌胃后24h处死小鼠;收集血清标本、脾脏和空肠组织,-80℃下保存。分别对小鼠临床体征、脾脏指数、空肠组织病理学、血清特异性IgE的测定和血清中组胺和细胞因子的分析。

03

结果与讨论

1 沙棘汁减轻TM致食物过敏小鼠的过敏症状

I型过敏反应的特点是TM激发30~60分钟后出现轻微腹泻。在下图观察到粪便中的索状物 1A-B,提示肠反应异常。与NS组相比,TM组导致更高的临床评分,如活动减少、呼吸和喘息频率增加(P沙棘汁对TM激发所增加的症状积分也有明显的抑制作用。

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2 致敏小鼠灌胃沙棘汁后肠道组织病理学分析

为探讨沙棘汁诱导的免疫应答改变对肠道症状的缓解作用,对小鼠肠道的形态学进行了进一步观察。TM组肠道粘膜和绒毛明显受损、肿胀,数量明显减少(图2)。沙棘汁反复灌胃,肠黏膜形态明显恢复,黏膜完整,肠绒毛排列整齐,组织结构完整。沙棘汁干预可以通过修复整体黏膜来减轻过敏反应 。

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3 沙棘汁对脾脏指数的影响

脾脏形态变化和脾脏指数可以作为评定致敏反应的指标。与对照组相比,TM 致敏后脾脏增大(图3A)。过敏小鼠的脾脏指数有部分上升,沙棘汁干预后脾脏指数有一定程度的下降(图3B)。

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4 沙棘汁抑制过敏小鼠IgE的产生

与正常小鼠相比,TM诱导的食物过敏小鼠IgE水平显著升高(P

5 沙棘汁对TM致食物过敏小鼠组胺产生的影响

与正常小鼠相比,虾过敏小鼠血清组胺水平也升高,这是导致食物过敏症状的关键指标。沙棘汁组血清组胺浓度也有降低,但无显著差异(图6),表明有明显的阳性反应。

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6 沙棘汁抑制致敏小鼠TNF-α,刺激IL-10的产生

与NS组相比,致敏组显著升高血清TNF-α水平(图6A),降低血清IL-10水平。沙棘汁能有效降低虾过敏小鼠血清中TNF-α的升高,促进IL-10的分泌。TM组与NS组间IL-10水平无显著差异,而SJ组与TM组间有显著差异。沙棘汁具有较强的免疫活性,可用于缓解TM过敏。

结论:结果表明,沙棘汁对TM诱导的食物过敏小鼠的过敏症状有抑制作用。口服沙棘汁有利于肠黏膜的修复,抑制与肥大细胞或嗜碱性粒细胞结合的IgE抗体的接触,降低导致过敏症状的组胺和其他指标。作为一种潜在的缓解Ⅰ型过敏的食品,其抗过敏作用机制有待进一步研究。

本期图文|孙涛

本期编辑|熊文文

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